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Abril de 2018 Página 5 de 7

Nuevas tecnologías en diagnóstico microbiológico: automatización y algunas aplicaciones

Beatrice Hervé E., MD

La optimización de los flujos de trabajo, en el pre analítico, los estudios de susceptibilidad y el post analítico, es clave para automatizar la microbiología.

Estudios de susceptibilidad

En cuanto a estudios de susceptibilidad a antimicrobianos, existen diferentes metodologías, que se pueden sistematizar en: convencionales o fenotípicos, y automatizados ya sea fenotípicos o genotípicos. Cada vez más, es necesario detectar de manera oportuna y precisa, la existencia de mecanismos de resistencia con implicancia epidemiológica, como son: Enterococcus resistentes a vancomicina, S. aureus con sensibilidad reducida a vancomicina, enterobacterias productoras de Betalactamasas de Espectro Extendido (BLEE) o productoras de carbapenemasas. Estos mecanismos de resistencia pueden ser detectados por técnicas rápidas, de screening, o confirmatorias, ya sea fenotípicas o genotípicas, que deben estar disponibles para realizar frente a una alerta en la interpretación del antibiograma (generalmente estas alertas están dadas por la identificación de alguna especie en particular, o la detección de concentraciones inhibitorias mínimas (CIM) sugerentes) [15–18]

Los métodos convencionales o fenotípicos, a su vez pueden ser:

  1. Cuantitativos: permiten conocer la CIM de un antimicrobiano frente a un determinado microorganismo (en ug/ml), lo que es de gran utilidad al momento de definir las dosificaciones, especialmente en pacientes críticos. Existen métodos cuantitativos de referencia o Gold standard (ya sea micro o macro dilución en caldo y/o dilución en agar) y aquellos que no son de referencia (E-test, Just-One), pero que facilitan de manera importante la realización de antibiograma por CIM en la práctica diaria a la vez que da flexibilidad respecto de a qué antimicrobianos estudiar la CIM y a cuáles no.
  2. Cualitativos (difusión en disco o Kirby Bauer), que a través de la medición de un halo en mm permite correlacionar con la CIM y entregar una categoría de Susceptible, Intermedio o Resistente frente a cada antimicrobiano.
  3. De screening y punto de corte, permiten separar cepas con algún mecanismo de resistencia específico, de aquellas que no lo poseen. Para esto, existen diversos agares cromógenos o de screening, que contienen una concentración de antimicrobiano que constituye el punto de corte para identificar las cepas resistentes.

Los métodos automatizados disponibles son:

  1. Microdilución rápida (métodos comerciales fenotípicos: Vitek, Phoenix, Microscan). Estos métodos, al igual que la identificación automatizada, consisten en paneles con pocillos miniaturizados que contienen diferentes concentraciones de antimicrobianos, según los puntos de corte que permiten diferenciar cepas resistentes de cepas intermedias o sensibles. Estos paneles o tarjetas contienen antimicrobianos definidos para los distintos grupos de microorganismos (bacilos, cocáceas, levaduras, gram positivo, gram negativo), se ingresan al equipo respectivo, el cual mediante turbidimetría establece las CIM de cada cepa. Actualmente estos equipos cuentan con softwares de interpretación o reglas de experto, para informar resultados coherentes de susceptibilidad. Estos equipos permiten realizar la identificación (ya sea bioquímica o por MALDI) y estudio de susceptibilidad en forma integrada [19].
  2. PCR (métodos comerciales genotípicos), que detectan presencia de genes de resistencia conocidos, o bien,
  3. La detección de perfiles proteómicos mediante MALDI-TOF post exposición a un determinado antimicrobiano.

Las últimas dos mencionadas, son técnicas en desarrollo o ya comercializadas, que escapan el ámbito de esta revisión. [20,21]. En la Tabla N°6 se muestra una comparación de las principales características de las diferentes metodologías fenotípicas mencionadas.

Tabla 6. Cuadro comparativo principales características de los métodos de estudio fenotípicos de susceptibilidad a antimicrobianos

Método Precisión Facilidad Flexibilidad Velocidad (resultado) Costo
Dilución caldo Gold Standard + +++ + ++
Dilución Agar Gold Standard + +++ + ++
Difusión Disco + +++ +++ + +
Screening + +++ + + ++
Automatizados ++ ++ + +++ +++
E-test ++ +++ +++ + +++

Actualmente persiste un desfase entre la velocidad de identificación que se logra por espectrometría de masas, y la menor velocidad en obtener un resultado de susceptibilidad a antimicrobianos, ya que, a pesar de su automatización, esta última sigue basada en la velocidad de replicación del microorganismo.


Palabras relacionadas:
Diagnóstico de laboratorio, Microbiología, automatización, identificación microbiana, estudios de susceptibilidad, la automatización del laboratorio de microbiología, identificación bacteriana y los estudios de susceptibilidad, verificación de la tecnología MALDI-TOF, protocolos publicados para urocultivo y hemocultivo.

Acerca del autor

Beatrice Hervé E., MD

Microbióloga. Médica Consultora del Laboratorio de Microbiología de la Clínica Las Condes, de Chile.
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