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EH Feb/Mar'15

14 BIOLOGÍA MOLECULAR febeorr - amrzo / 2015 Molécula de ADN desenrollándose de un cromosoma en el interior del núcleo de una célula. NATIONAL HUMAN GENOME RESEARCH INSTITUTE Con la administración de pequeñas cantidades del radiofármaco es posible conocer la biodistribución del vector administrado, y las señales in vivo captadas pueden relacionarse cuantitativamente con el nivel de expresión génica. señal específica proporciona datos sobre la expresión del transgen junto con información anatómica del tejido blando y tisular funcional. Mediante imágenes de resonancia magnética de Transferencia de Saturación de Intercambio Químico (CEST) (traducido de Chemical Exchange Saturation Transfer) puede ser monitoreada la expresión del transgen usando compuestos orgánicos, metálicos o ambos, con tasas apropiadas de intercambio químico y frecuencias de resonancia. La técnica trabaja por el intercambio químico entre protones en solutos como medios de contraste con estos en agua. 12 La PET es una técnica no invasiva capaz de ofrecer información bioquímica y metabólica de los diferentes órganos, que detecta y cuantifica imágenes de cantidades picomolares de materiales radiomarcados in vivo. Se utiliza para el diagnóstico de la patología, y medir la biología y seguridad de los vectores. 13 Las sondas reportero radiactivas etiquetadas con isótopos emisores de positrones, como la fludeoxiglucosa (F 18), el oxígeno 15O, y el cobre 64Cu, una vez administradas al paciente se distribuyen en el organismo y se concentran en células o tejidos específicos, de donde son tomadas por las células diana, ligando con receptores específicos. Los receptores son fosforilados, y la desintegración del isótopo conlleva a la emisión de energía y su acumulación, que puede ser cuantificada por la PET. Además, permite la reconstrucción volumétrica de la información y la generación de imágenes tomográficas de alta resolución. Para facilitar las imágenes del gen y la sonda reporteros usando PET o SPECT se emplean enzimas-base o intracelulares, en las que la enzima reportero de imagen en las células que expresan el gen reportero atrapado en la sonda fosforilizan el sustrato radiotrazador. Estas son de sencillo diseño y baja respuesta inmune. Para la TG del cáncer se pueden aplicar sistemas que permitan la activación local de profármacos con potencial tumoricida, como la transferencia a las células tumorales del gen de la timidina kinasa del virus del herpes simple tipo 1 (HSV1-tk). 14 La visualización externa y la cuantificación de su transferencia génica se fundamentan en la utilización como sonda de imagen de la timidina kinasa viral que produce el efecto terapéutico. 15-17 Los receptores de superficie expresados como el transportador-base usan radiofármacos con vida media en promedio de 110 minutos. Son aproximaciones temporosensibles para llevar transportadores de membrana a las células diana, que facilitan la toma de la sonda reportera y tienen una cinética satisfactoria. Entrega del gen El envío objetivo del transgen ayuda a limitar los efectos adversos de la toxicidad de la TG. Las imágenes médicas vasculares y convencionales cumplen una función crítica en la entrega de genes suicidas que pueden ayudar a destruir células malignas y al monitoreo de la entrega del gen. 1 La exposición de las células a ondas de ultrasonido o eléctricas durante microsegundos, sonoporación o electroporación, incrementa la permeabilidad de la membrana, y permite la entrada celular y la expresión y transferencia de material genético dentro de ellas. En la sonoporación se desarrollan poros temporales en la membrana usando ondas de sonido, mientras que en la electroporación, con pulsos eléctricos se permea la membrana celular con pequeños huecos. 1,18 El ultrasonido focal puede colapsar los liposomas –vesículas lipídicas que en la TG llevan encapsulada el contenido genético al interior de la célula–, e instigarlos a liberarlo. La magnitud y duración de los pulsos pueden ser optimizadas para maximizar la transferencia del gen y minimizar el daño de las membranas 19. Las tasas de transferencia in vitro usando ultrasonido son generalmente más altas que las reportadas en estudios in vivo. Kaplitt y E IMÁGENES MÉDICAS


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